梯度PCR仪是PCR仪的一种,如今梯度PCR仪更多的应用于科研、教学机构。君意生物的小编就和大家一起来了解一下梯度PCR仪:
一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常12种温度梯度)的称之为梯度PCR仪。因为被扩增的不同的DNApian段其较适合的退火温度不同,通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增,从而一次性PCR扩增就可以筛选出表达量高的较适合退火温度进行有效的扩增。主要用于研究未知DNA退火温度的扩增,这样既节约时间,也节约经费。在不设置梯度的情况下亦可当做普通的PCR用。正真的梯度,是每一排管都有精准的加热控温探头,2009年为止只有美国ABI公司可以做到。其他的都是从两头的热传递来设计控温。
PCR仪是一种利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内InVitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。因而,在PCR仪使用时对于环境要求很高,为了避免实验未完成前可能出现的任何污染反应液的情况,应该了解关于反应液受到污染时,反应液处理方法:
紫外照射法:未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液进行紫外照射,注意事项与方法同上述UV照射法;
内切酶法:选择识别4个碱基的内切酶(如Msp I和Taq I等),可同时选择几种,以克服用一种酶只能识别特定序列的缺陷,室温作用1h 后加热灭活进行PCR;
DNase I法:PCR混合液(未加模板和Taq聚合酶)加入0.5U DNase I,室温反应30 min后加热灭活,PCR基因扩增仪价格,然后加入模板和Taq聚合酶进行正常PCR扩增。该方法的优点是不需要知道污染DNA的序列;
g射线辐射法:1.5kGy的辐射可完全破坏0.1ng基因组DNA,2.0 kGy可破坏104拷贝的质粒分子,4.0 kGy仍不影响PCR,但**此限度会使PCR扩增效率下降。引物可受照射而不影响PCR,g射线是通过水的离子化产生自由基来破坏DNA的。
PCR仪的使用要求很高,因此不允许在实验过程中出现一丝错误,尤其是任何与实验有关的物品的污染情况。上述关于PCR仪反应液污染情况的及时处理方法一定能帮助您在实验中出现类似情况时及时处理。