PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,荧光定量PCR仪,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。PCR仪器温度控制性能的影响因素:
一、PCR仪器之间的差别对实验结果的影响。如前所述,PCR仪价格,没有任何两台PCR仪器的温度控制是一模一样的。相对于预设的温度模块温度总是偏高或偏低,就是同一模块不同的孔之间,温度有时也会不一样,相差可能达几摄氏度之多。一些PCR仪温度控制性能的不足造成的后果是:当PCR仪的模块温度在升温时,温度过冲或不足,不能准确的达到预设的平台温度。
二、温度控制技术的差别对实验结果的影响。导致PCR仪温度控制性能优劣的因素,首先是温度控制技术。调节PCR仪模块的温度,使其达到并保持在某一温度有很多方式。每一种方式都有优点和缺点。另外,这些技术被运用控制的水平对于温度控制的水准是很重要的,基因扩增仪PCR,且有很大不同。大多数PCR仪器的温度控制性能是很差的。在单一或多传感器控制机制上的不同显而易见的引起了温度的不均一性。
PCR仪工作原理利用升温使DNA变性,在聚合酶的作用下使单链复制成双链,进而达到基因复制的目的。PCR的反应包括三个主要步骤分别是:
1. Denaturation 2. Annealing of primers,3. Extension of primers。 所谓 Denaturing乃是将DNA加热(至90~95℃)变性, 将双股的DNA加热后转为单股DNA以做为复制的模板. 而Annealing 则是令 Primers于一定的温度下(冷却至55~60℃)附着于模板DNA两端。 最后在DNA聚合酶e.g. Taq-polymerase 的作用下(加热至70~75℃)进行引物的延长 Extension of primers及另一股的合成。PCR的较早设想核酸研究已有100多年的历史,二十世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术,Korana于1971年较早提出核酸体外扩增的设想:“经过DNA变性,PCR仪,与合适的引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。