PCR仪工作原理利用升温使DNA变性,在聚合酶的作用下使单链复制成双链,进而达到基因复制的目的。PCR的反应包括三个主要步骤分别是:
1. Denaturation 2. Annealing of primers,3. Extension of primers。 所谓 Denaturing乃是将DNA加热(至90~95℃)变性, 将双股的DNA加热后转为单股DNA以做为复制的模板. 而Annealing 则是令 Primers于一定的温度下(冷却至55~60℃)附着于模板DNA两端。 最后在DNA聚合酶e.g. Taq-polymerase 的作用下(加热至70~75℃)进行引物的延长 Extension of primers及另一股的合成。PCR的较早设想核酸研究已有100多年的历史,二十世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术,Korana于1971年较早提出核酸体外扩增的设想:“经过DNA变性,与合适的引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。
PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。PCR仪器温度控制性能的影响因素:
1、仪器老化对实验结果的影响。虽然PCR仪没有任何的机械或可移动部件,但是那并不意味着它不会磨损。电子器件的性能会随着时间的延长而老化,并由于过度的使用而加速老化。Peltier器件的失效或磨损会引起模块的热斑或冷斑,通常PCR仪器不能识别这种由于机械磨损,模块延展和收缩效应引起的温控性能的不同。因此,为掌握这些情况,实时监测PCR仪的温度控制性能是重要的。出于同样的原因,PCR仪温控性能的失常通常是实验失败或毁坏循环反应的重要原因。
2、外部因素对实验结果的影响。不同PCR仪品牌与型号在温度控制性能上的不同直接影响了三种温度平台的温度的准确性和不均一性,因而影响了整个PCR反应的实验结果。另外,升温速度的不同,pcr扩增仪报价,温度下降梯度的不均一性,温度过低,温度过冲,也是重要的因素。较差的情况,一个本该阳性的结果却可能得出阴性的结果。对于实时PCR,荧光信号输出和产量/溶解曲线,直接与温度控制有关系,而这些结果很可能是戏剧性的。