对于使用染料法的定量PCR反应,虽然有各种各样的PCR引物设计软件或者经验公式计算熔解温度(Tm值),荧光定量基因扩增仪,但运用的公式不同、引物序列不同,Tm值的差异会很大。
引物的熔解温度决定了退火温度。而且模版中碱基的组合千变万化,对于特殊片断,经验公式得到的数据不一定能得出准确的结果,梯度pcr基因扩增仪,退火温度细微的差异对结果都可能产生决定性的影响,pcr基因扩增仪,因而“摸条件”一度是让人很头疼的问题。梯度PCR的出现部分解决了一些问题——在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在指l定范围内按照梯度变化,基因扩增仪,根据结果,一步就可以摸索出较适合的反应条件。
不单退火温度,连变性温度和延伸温度都可以优化——对于多种聚合酶混合酶扩增如Invitrogen、Clontech、Promega的多数高保真Taq酶来说这个非常重要,因为Taq和校正酶的较l佳反应温度可能有显著差异,优化延伸温度就显得很重要。
PCR仪,中文是聚合酶链式反应,其实是一种DNA的快速扩增技术,其扩增效率之高就象核裂变的“链式反应”那样。
PCR技术有以下几个特点:一是被扩增的DNA所需量较小,理论上讲一个分子就可以用于扩增了;二是扩增效率高,目的基因的量成指数形式扩增,几个小时就扩增1000万倍以上。现在PCR技术已经被广泛地应用于生命科学研究、食品卫生、法医及环境监测等诸多方面。