荧光定量PCR技术检测准确,快速,重复性高在食品*领域发挥重要作用,目前已经应用于食源性致病病毒、食品过敏源、转基因食品、乳品等检测,那具体是怎么样实施的呢?请看小编为您的介绍:
在食源性致病病毒检测中,长期以来采用细l菌培养法但是这种方法检测周期长,灵敏度低,操作复杂,荧光定量PCR技术动态范围宽,灵敏度高,检测速度快(40-60 min),基因扩增仪,已在副溶血性弧菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆l菌和和阪崎肠杆l菌等食源性细l菌检测中越来越重要。荧光PCR对2084个感染性腹泻标本的检测,pcr基因扩增仪,其中培养法阳性检出率为45.2%而荧光PCR为90.1%。再如我国出入境检验检疫行业标准SNT 1870-2007中规定对食品中致病菌检测方法使用荧光PCR方法,SN/T1632.3-2005中要求使用荧光PCR方法检测奶粉中阪崎肠杆l菌检验方法。
荧光定量PCR做标准曲线
1。 可能来自反转录系统。反转录反应的成分不可避免要进入PCR,但其实反转录系统中的某些成分可能抑制PCR反应。如果为了增强信号而使用多过厂商建议分量的cDNA,则可能遇到此种问题。
2。 可能来自RNA样本带有的杂质。这个可以通过260/280,260/230吸收峰比值来检查。260/280需要达到1.8以上,基因扩增仪价格,较l好在2左右。如果样本不纯,可以考虑优化抽提步骤。
3。如果以上两个问题不存在或无法解决,就只有根据曲线的线性区间,选择可以得到线性扩增的模板用量来实验。这里面的原理是PCR inhibitor经过稀释以后作用可以减低至可以忽略。