荧光定量PCR仪主要应用于临床医学检测、食品行业、科研院校等。今天君意生物的小编就和大家一起来了解一下荧光定量PCR仪:
在普通PCR仪设计基础上增加荧光信号激发和采集系统和计算机分析处理系统,形成了具有荧光定量PCR功能的仪器。其PCR扩增原理和普通PCR扩增原理相同,在PCR扩增时加入的引物是利用同位素、荧光素等进行标记,使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合扩增。扩增的结果通过荧光信号采集系统实时采集信号连接输送到计算机分析处理系统,得出量化的实时结果输出。
荧光定量PCR仪有单通道,双通道和多通道之分。当只用一种荧光探针标记的时候,选用单通道;有多种荧光标记的时候使用多通道。单通道也可以检测多荧光的标记和目的基因表达产物,因为一次只能检测一种目的基因的扩增量,需多次扩增才能检测完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR,实现一次检测多种目的基因的功能。
荧光定量PCR中dna合成的注意事项
1、严格的提取RNA是较关键的一步,普通基因扩增仪,如果有条件就上Qiagen的盒子或者用Trizol等自己按照方法提取。
2、良好的总RNA,基因扩增仪,如果需要,可以纯化,获取mRNA,纯化的柱子好坏有差异,一般一分钱一分货。
3、可参考一下 fermentas的revert Aid系列的反转录酶,选择适合你的种类。
4、反转录后的效率测定,一定注意严格定量哦!引物的合成,请采用色谱级别。稀释时注意均匀。