荧光定量PCR中dna合成的注意事项
1、严格的提取RNA是较关键的一步,如果有条件就上Qiagen的盒子或者用Trizol等自己按照方法提取。
2、良好的总RNA,荧光定量pcr仪,如果需要,触屏pcr仪,可以纯化,获取mRNA,纯化的柱子好坏有差异,一般一分钱一分货。
3、可参考一下 fermentas的revert Aid系列的反转录酶,选择适合你的种类。
4、反转录后的效率测定,一定注意严格定量哦!引物的合成,请采用色谱级别。稀释时注意均匀。
PCR仪如今在我们的生活中应用的是很广泛的,我们在操作PCR仪的时候,要如何正确的来进行操作呢?下面就跟随君意生物一起来看看吧:
1、按PCR仪正面左下角电源开关,启动PCR仪。
2、放PCR仪离心管,先把顶盖向上扳,pcr仪,再往前推,露出放样孔,PCR管放入前应加好反应体系各组分,再放入PCR仪离心管。
3、反向重复第二步骤将顶盖板向后拉,盖好顶盖。
4、按F2“Create”新建一个扩增的PCR程序。
5、按控制台面右方上下左右方向键,可随意移动编辑位置,输入需要的温度、时间、循环数等。
6、据PCR离心管中加入的反应体积总量,在“Reactionvolume”后输入相应数值,有Std“1~100ul”和9600“1~50ul”两档可供选择。
7、按F1“Start”启动
8、按“INFO”对应键查看PCR仪束键。
9、扩增完成后按台面左方“Stop”键退出。
10、按“Hist”,可查看上次扩增的历史记录。