实时荧光定量PCR仪的原理是应用PCR技术,PCR技术的本质是核酸扩增技术,通过加热使双链DNA解开螺旋,pcr基因扩增仪,在退火温度条件下引物同模板DNA杂交。
在Taq DNA聚合酶,dNTPs,Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物,重复上述“变性→退火→引物→延伸”过程至25-40个循环,呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数,可以在体外对目的核酸进行大量复制。
根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,梯度PCR仪,原位PCR仪,实时荧光定量PCR仪四类。
基因扩增PCR仪的使用方法:
PCR由变性--退火(复性)--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至90~95℃一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55~60℃,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在DNA聚合酶的作用下,于70~75℃,基因扩增仪,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,pcr基因扩增仪厂家,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。