实时荧光定量PCR仪的原理是应用PCR技术,PCR技术的本质是核酸扩增技术,通过加热使双链DNA解开螺旋,在退火温度条件下引物同模板DNA杂交。
在Taq DNA聚合酶,pcr基因扩增仪,dNTPs,基因扩增仪,Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物,重复上述“变性→退火→引物→延伸”过程至25-40个循环,呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数,梯度基因扩增仪,可以在体外对目的核酸进行大量复制。
PCR仪也叫基因扩增仪,它是利用PCR技术对特定基因做体外的大量合成,用于以检测DNA/RNA为目的的各种基因分析。
PCR技术原理
该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下,依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板,借助一小段双链DNA来启动合成,通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合,形成部分双链。在适宜的温度和环境下,DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3′-OH末端,基因扩增仪厂家,并以此为起始点,沿模板5′→3′方向延伸,合成一条新的DNA互补链。
PCR反应步骤
分别是1.变性,2.引物退火,3.引物延伸。 所谓变性是将DNA加热至90-95℃变性,将双链DNA加热后转为单链DNA做为复制的模板. 而引物退火则是引物于一定的温度下(冷却至55-60℃)附着于模板DNA两端。 最后在DNA聚合酶的作用下(加热至70-75℃)进行引物的延伸及另一链的合成。