济南君意生物 图 、基因扩增仪pcr、基因扩增仪

荧光定量PCR做标准曲线

1。 可能来自反转录系统。反转录反应的成分不可避免要进入PCR，但其实反转录系统中的某些成分可能抑制PCR反应。如果为了增强信号而使用多过厂商建议分量的cDNA，则可能遇到此种问题。

2。 可能来自RNA样本带有的杂质。这个可以通过260/280，260/230吸收峰比值来检查。260/280需要达到1.8以上，较l好在2左右。如果样本不纯，可以考虑优化抽提步骤。

3。如果以上两个问题不存在或无法解决，就只有根据曲线的线性区间，选择可以得到线性扩增的模板用量来实验。这里面的原理是PCR inhibitor经过稀释以后作用可以减低至可以忽略。

实时荧光定量PCR是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。

Real-time PCR是在PCR扩增过程中，PCR基因扩增仪，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量 PCR 反应中，基因扩增仪厂家，引入了一种荧光化学物质，随着 PCR 反应的进行，基因扩增仪，PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，基因扩增仪pcr，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。