济南君意生物 图 ,梯度基因扩增仪,基因扩增仪

PCR仪也叫基因扩增仪，它是利用PCR技术对特定基因做体外的大量合成，用于以检测DNA/RNA为目的的各种基因分析。

PCR技术原理

该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，基因扩增仪，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3′-OH末端，并以此为起始点，沿模板5′→3′方向延伸，普通基因扩增仪，合成一条新的DNA互补链。

PCR反应步骤

分别是1.变性，2.引物退火，3.引物延伸。 所谓变性是将DNA加热至90-95℃变性，将双链DNA加热后转为单链DNA做为复制的模板. 而引物退火则是引物于一定的温度下（冷却至55-60℃）附着于模板DNA两端。 最后在DNA聚合酶的作用下（加热至70-75℃）进行引物的延伸及另一链的合成。

对于使用染料法的定量PCR反应，虽然有各种各样的PCR引物设计软件或者经验公式计算熔解温度（Tm值），梯度pcr基因扩增仪，但运用的公式不同、引物序列不同，Tm值的差异会很大。

引物的熔解温度决定了退火温度。而且模版中碱基的组合千变万化，对于特殊片断，经验公式得到的数据不一定能得出准确的结果，退火温度细微的差异对结果都可能产生决定性的影响，梯度基因扩增仪，因而“摸条件”一度是让人很头疼的问题。梯度PCR的出现部分解决了一些问题——在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在指l定范围内按照梯度变化，根据结果，一步就可以摸索出较适合的反应条件。

不单退火温度，连变性温度和延伸温度都可以优化——对于多种聚合酶混合酶扩增如Invitrogen、Clontech、Promega的多数高保真Taq酶来说这个非常重要，因为Taq和校正酶的较l佳反应温度可能有显著差异，优化延伸温度就显得很重要。