如今市面上的PCR仪器有很多品牌,很多的种类,我们在选购PCR仪器的时候,需要如何来进行选购呢?下面就跟随君意生物的小编一起来了解一下吧:
如今的PCR仪器主要分为三大类:标准PCR(终点PCR)、实时定量PCR(qPCR)以及数字PCR(dPCR)。前两者大家都很熟悉,而后者是这两年冉冉升起的新星。
标准PCR仪主要是产生大量的核酸序列供后续实验使用,比如测序、克隆,基因扩增仪厂家,或仅仅是为了在凝胶上看看有没有合适的条带。
qPCR则是实时定量靶序列,通常被用来测定生物分子的丰度,而不是生成终产物。“有了qPCR,研究人员就不再关心PCR产物发生了什么。他们的问题是:开始时有什么?突变是否存在?”罗氏的技术服务科学家Joe Donnenhoffer谈道。
数字PCR也是定量的,但并非实时。反应发生在大量的微小分区中。这些分区很小,其中每个可能包含0或1个DNA分子。通过计算阳性反应的数量,研究人员能够真正定量DNA。这比qPCR更为灵敏,也不需要标准曲线。
对于标准PCR仪和定量PCR仪之间的选择,研究人员通常都心里有数。不过,梯度基因扩增仪,说到qPCR和dPCR之间的选择,pcr基因扩增仪,研究人员就没那么有把握了,有时也需要帮助。据Bio-Rad的高级营销经理Viresh Patel介绍,基因扩增仪,这个选择通常取决于研究人员的应用和他们想要回答的问题。“当我们听到拷贝数分析或突变检测时,数字PCR通常能提供一个更好的答案,更明确的答案,”Patel说。不过对于高通量应用,qPCR则更实际。
PCR仪的技术发展同时,新的扩增技术也不断诞生。有的可结合应用,共同构成了核酸体外扩增技术。
1、聚合酶链反应的发明。
聚合酶链反应使人们梦寐以求的体外无限扩增核酸片段的愿望成为现实。其原理类似于DNA的体内复制,只是在试管中给DNA的体外合成提供一种合适条件。由于该酶不耐热,加热变性DNA后都要重新补加Klenow酶。耐热DNA聚合酶的应用使得PCR仪反应更易于自动化,推出了*1台PCR热循环仪,使产品技术的自动化成为现实。
2、核酸体外扩增的设想。
用DNA聚合酶延伸引物,并不断重视的过程便可克隆RNA基因。但由于当时很难进行测序和合成寡核苷酸引物,DNA限制性内切酶,使体外克隆基因成为可能,使Khorana等的早期设想被人们遗忘。